凯氏定氮仪的使用步骤

蒸馏和吸收是在微量凯氏定氮仪内进行的
。凯氏定氮蒸馏装置种类甚多
，大体上都由蒸气发生、氨的蒸馏和氨的吸收三部分组成。

1 、仪器的洗涤

仪器安装前，各部件需经一般方法洗涤干净 ，所用橡皮管
、塞须浸在10%NaOH溶液中
，煮约10min，水洗、水煮10min ，再水洗数次
，然后安装并固定在一只铁架台上 。仪器使用前，微量全部管道都须经水蒸气洗涤 ，以除去管道内可能残留的氨
，正在使用的仪器，每次测样前 ，蒸气洗涤5min即可
。较长时间未使用的仪器
，重复蒸气洗涤，不得少于三次 ，并检查仪器是否正常。仔细检查各个连接处，保证不漏气 。 首先在蒸气发生器中加约2/3体积蒸馏水
，加入数滴硫酸使其保持酸性，以避免水中的氨被蒸出而影响结果 ，并放入少许沸石（或毛细管等）
，以防爆沸
。沿小玻杯壁加入蒸馏水约20mL让水经插管流入反应室，但玻杯内的水不要放光 ，塞上棒状玻塞
，保持水封，防止漏气。蒸气发生后 ，立即关闭废液排放管上的开关
，使蒸气只能进入反应室，导致反应室内的水迅速沸腾 ，蒸出蒸气由反应室上端口通过定氮球进入冷凝管冷却
，在冷凝管下端放置一个锥形瓶接收冷凝水 。从定氮球发烫开始计时，连续蒸煮5min ，然后移开煤气灯
。冲洗完毕，夹紧蒸气发生器与收集器之间的连接橡胶管
，由于气体冷却压力降低，反应室内废液自动抽到反应室外壳中 ，打开废液排出口夹子放出废液。如此清洗2～3次
，再在冷凝管下换放一个盛有硼酸-指示剂混合液的锥形瓶使冷凝管下口完全浸没在溶液中，蒸馏1～2min ，观察锥形瓶内的溶液是否变色 。如不变色
，表示蒸馏装置内部已洗干净
。移去锥形瓶，再蒸馏1～2min ，用蒸馏水冲洗冷凝器下口
，关闭煤气灯，仪器即可供测样品使用。

2 、无机氮标准样品的蒸馏吸收

由于定氮操作繁琐 ，为了熟悉蒸馏和滴定的操作技术
，初学者宜先用无机氮标准样品进行反复练习，再进行有机氮未知样品的测定 。常用巳知浓度的标准硫酸铵测试三次。 取洁净的100mL锥形瓶五只 ，依次加入2%硼酸溶液20mL，次甲基蓝-甲基红混合指示剂（呈紫红色）3～4滴
，盖好瓶口待用
。取其中一只锥形瓶承接在冷凝管下端，并使冷凝管的出口浸没在溶液中。注意：在此操作之前必须先打开收集器活塞 ，以免锥形瓶内液体倒吸 。准确吸取2mL硫酸铵标准液加到玻杯中
，小心提起棒状玻塞使硫酸铵溶液慢慢流入蒸馏瓶中，用少量蒸馏水冲洗小玻杯3次 ，一并放人蒸馏瓶中
。然后用量筒向小玻杯中加入10 mL 30%NaOH溶液
，使碱液慢慢流入蒸馏瓶中，在碱液尚未完全流入时 ，将棒状玻塞盖紧。向小玻杯中加约5mL蒸馏水
，再慢慢打开玻塞，使一半水流入蒸馏瓶 ，一半留在小玻杯中作水封 。关闭收集器活塞
，加热蒸气发生器，进行蒸馏
。锥形瓶中的硼酸-指示剂混合液由于吸收了氨 ，由紫红色变成绿色。自变色时起，再蒸馏3～5min
，移动锥形瓶使瓶内液面离开冷凝管下口约lcm，并用少量蒸馏水冲洗冷凝管下口 ，再继续蒸馏1min
，移开锥形瓶，盖好 ，准备滴定 。 在一次蒸馏完毕后
，移去煤气灯，夹紧蒸气发生器与收集器间的橡胶管 ，排除反应完毕的废液
，用水冲洗小玻杯几次，并将废液排除
。如此反复冲洗干净后 ，即可进行下一个样品的蒸馏。按以上方法用标准硫酸铵再做两次 。另取2mL蒸馏水代替标准硫酸铵进行空白测定二次
。将各次蒸馏的锥形瓶一起滴定。

3
、未知样品及空白的蒸馏吸收

将消化好的蛋白样品三支
，空白对照液三支，依次作蒸馏吸收 。 加5mL热的蒸馏水至消化好的样品或空白对照液中 ，通过小玻杯加到反应室中，再用热蒸馏水洗涤小玻杯3次
，每次用水量约3mL，洗涤液一并倒入反应室内。其余操作按标准硫酸铵的蒸馏进行
。 由于消化液内硫酸钾浓度高而呈粘稠状 ，不易从凯氏烧瓶内倒出
，必须加入热蒸馏水5 mL稀释之，如果有结晶析出 ，必须微热溶解
，趁热加入玻杯，使其流入反应室。此外 ，还应当注意趁仪器洗涤尚未完全冷却时立即加入样品或空白对照液
，否则消化液通过冷却的管道容易析出结晶，造成堵塞 。 样品和空白蒸馏完毕后 ，一起进行滴定
。打开接受瓶盖
，用酸式微量滴定管以0.0100mol/L的标准盐酸溶液进行滴定。待滴至瓶内溶液呈暗灰色时，用蒸馏水将锥形瓶内壁四周淋洗一次 。若振摇后复现绿色 ，应再小心滴入标准盐酸溶液半滴，振摇观察瓶内溶液颜色变化
，暗灰色在一二分钟内不变，当视为到达滴定终点
。若呈粉红色 ，表明已超越滴定终点
，可在已滴定耗用的标准盐酸溶液用量中减去0.02mL，每组样品的定氮终点颜色必须完全一致。空白对照液接受瓶内的溶液颜色不变或略有变化尚未出现绿色 ，可以不滴定 。记录每次滴定耗用标准盐酸溶液毫升数
，供计算用
。